摘要：為預(yù)防和控制燦爛弧菌引發(fā)的仿刺參腐皮綜合征，促進(jìn)仿刺參養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，利用LwCas13a中特異性CRISPR RNA(crRNA)與靶RNA結(jié)合后可激活Cas13a蛋白對(duì)外源RNA分子附屬切割活性的特征，結(jié)合重組酶介導(dǎo)的聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),建立1種針對(duì)燦爛弧菌gyrB基因的快速、靈敏、特異的定量檢測(cè)方法——RPA-Cas13a。RPA-Cas13a可實(shí)現(xiàn)在37℃恒溫下、60 min內(nèi)對(duì)燦爛弧菌的快速實(shí)時(shí)檢測(cè)。靈敏度測(cè)試結(jié)果顯示，RPA-Cas13a檢測(cè)限為550拷貝/μL(gyrB),與熒光定量PCR的檢測(cè)靈敏度水平一致；特異性測(cè)試結(jié)果表明，RPA-Cas13a對(duì)創(chuàng)傷弧菌、哈維氏弧菌、鰻弧菌等其他弧菌及產(chǎn)黑假交替單胞菌、嗜水氣單胞菌、遲緩愛(ài)德華氏菌等常見(jiàn)水產(chǎn)動(dòng)物病原菌均無(wú)交叉反應(yīng)，特異性較強(qiáng)。RPA-Cas13a方法對(duì)仿刺參體表黏液(32份)、養(yǎng)殖池塘水體(15份)和表層沉積物(10份)等57份環(huán)境樣本的陽(yáng)性檢出率為8.77%,與傳統(tǒng)熒光定量PCR方法的檢出一致性高(Kappa=1.00),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明，燦爛弧菌的RPA-Cas13a新型定量檢測(cè)方法，快速簡(jiǎn)便、靈敏特異，可為預(yù)防和控制仿刺參腐皮綜合征的發(fā)生提供有力的分子工具。
